Бактериальная искусственная хромосома - Bacterial artificial chromosome

Бактериальной искусственной хромосомы ( ВАС ) представляет собой ДНК - конструкцию , на основе функциональной фертильности плазмиды (или F-плазмиды ), используется для трансформации и клонирования в бактерии , как правило , кишечная палочка . F-плазмиды играют решающую роль, потому что они содержат гены разделения, которые способствуют равномерному распределению плазмид после деления бактериальных клеток. Обычный размер вставки бактериальной искусственной хромосомы является 150-350 т.п.н. . Аналогичный вектор клонирования, называемый PAC , также был получен из ДНК бактериофага P1.

БАС часто используются для секвенирования генома организмов в проектах генома , например, в проекте «Геном человека» . Короткий фрагмент ДНК организма амплифицируется как вставка в ВАС, а затем секвенируется. Наконец, секвенированные части перестраиваются in silico , в результате чего получается геномная последовательность организма. BACs были заменены более быстрым и менее трудоемких методов секвенирования как целого генома дробовика последовательности и в настоящее время в последнее время следующего поколения секвенирования .

Общие компоненты гена

ОТВЕТ
для репликации плазмиды и регулирования количества копий.
Para и parB
для разделения плазмидной ДНК F на дочерние клетки во время деления и обеспечивает стабильное поддержание BAC.
Селективный маркер
на устойчивость к антибиотикам ; некоторые BAC также имеют lacZ на сайте клонирования для отбора синих / белых .
T7 и Sp6
фаговые промоторы для транскрипции встроенных генов.

Вклад в модели болезни

Наследственное заболевание

В настоящее время БАК в большей степени используются при моделировании генетических заболеваний , часто наряду с трансгенными мышами. ВАС были полезны в этой области, поскольку сложные гены могут иметь несколько регуляторных последовательностей перед кодирующей последовательностью, включая различные промоторные последовательности, которые будут регулировать уровень экспрессии гена. БАК до некоторой степени успешно использовались на мышах при изучении неврологических заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера, или в случае анеуплоидии, связанной с синдромом Дауна. Также были случаи, когда они использовались для изучения конкретных онкогенов, связанных с раком. Их переносят на эти модели генетических заболеваний путем электропорации / трансформации, трансфекции подходящим вирусом или микроинъекции. ВАС также можно использовать для обнаружения генов или больших последовательностей, представляющих интерес, а затем использовать для их картирования на хромосоме человека с использованием массивов ВАС . ВАС предпочтительнее для такого рода генетических исследований, потому что они вмещают гораздо большие последовательности без риска реаранжировки и, следовательно, более стабильны, чем другие типы векторов клонирования.

Инфекционное заболевание

Геномы нескольких крупных ДНК-вирусов и РНК-вирусов были клонированы как BAC. Эти конструкции называют «инфекционными клонами», поскольку трансфекции конструкции ВАС в клетки-хозяева достаточно для инициации вирусной инфекции. Инфекционные свойства этих БАК сделали изучение многих вирусов, таких как герпесвирусы , поксвирусы и коронавирусы, более доступными. Молекулярные исследования этих вирусов теперь могут быть выполнены с использованием генетических подходов для мутации BAC, пока он находится в бактериях. Такие генетические подходы основаны на линейных или кольцевых нацеленных векторах для осуществления гомологичной рекомбинации .

Смотрите также

использованная литература

внешние ссылки