Окрашивание серебром - Silver staining

В патологии , окрашивание серебра , является использование серебра , чтобы выборочно изменять внешний вид мишени в микроскопии на гистологические срезы ; в температурном градиентном гель-электрофорезе ; и в полиакриламидных гелях .

В традиционном витражей , серебро пятно представляет собой метод для получения желтого до оранжевого или коричневых оттенков (или зеленого на голубой стеклянной основе), путем добавления смеси , содержащей соединения серебра ( в частности , нитрат серебра ), и обжиг слегка. Он был введен вскоре после 1800 года и является «пятном» в термине «витраж». Соединения серебра смешивают со связующими веществами, наносят на поверхность стекла, а затем обжигают в печи или обжиговой печи.

История

Камилло Гольджи усовершенствовал окрашивание серебром для исследования нервной системы . Хотя точный химический механизм, с помощью которого это происходит, неизвестен, метод Гольджи окрашивает ограниченное количество клеток случайным образом полностью.

Окрашивание серебром было введено Кереньи и Галлясом в качестве чувствительной процедуры для обнаружения следовых количеств белков в гелях . Метод был распространен на изучение других биологических макромолекул , которые были разделены на различных носителях.

Классическое окрашивание кумасси бриллиантовым синим обычно позволяет обнаружить полосу белка 50 нг; окрашивание серебром увеличивает чувствительность обычно в 50 раз.

Многие переменные могут влиять на интенсивность окраски, и каждый белок имеет свои собственные характеристики окрашивания; чистая посуда, чистые реактивы и вода высшей степени чистоты - вот ключевые факторы успешного окрашивания.

Химия

Некоторые клетки аргентафиновые . Они восстанавливают раствор серебра до металлического серебра после фиксации формалином . Остальные клетки аргирофильные . Они восстанавливают раствор серебра до металлического серебра после контакта с пятном, содержащим восстановитель , например гидрохинон или формалин.

Нитрат серебра образует нерастворимый фосфат серебра с ионами фосфата ; этот метод известен как пятно фон Косса . Под воздействием восстановителя, обычно гидрохинона , образуется элементарное серебро черного цвета. Это используется для изучения образования частиц фосфата кальция во время роста костей.

Приложения

Гистологическая характеристика

Окрашивание серебром помогает визуализировать интересующие мишени, а именно внутриклеточные и внеклеточные клеточные компоненты, такие как ДНК и белки , такие как коллаген III типа и волокна ретикулина, путем осаждения частиц металлического серебра на интересующих мишенях.

Диагностическая микробиология

Pseudomonas , Legionella , Leptospira , H. pylori , Bartonella и Treponema , а также грибы, такие как Pneumocystis , Cryptococcus и Candida, являются микроорганизмами, окрашенными серебром.

Кариотипический анализ

Окрашивание серебром используется при кариотипировании . Нитрат серебра окрашивает белок, связанный с областью ядрышковой организации (NOR), образуя темную область, в которой осаждается серебро, и обозначает активность генов рРНК в NOR. Человеческие хромосомы 13, 14, 15, 21 и 22 имеют ЯОР, которые увеличивают активность окрашивания серебром как минимум в 50 раз.

Геномный и протеомный анализ

Окрашивание серебром используется для окрашивания гелей. Окрашивание белков серебром в гелях агарозы было разработано в 1973 году Кереньи и Галлясом. Позже он был адаптирован для полиакриламидных гелей, используемых в SDS-PAGE , а также для окрашивания ДНК или РНК. В гликозилировании из гликопротеинов и полисахаридов может быть окислено с помощью 1-часовой предварительной обработки с 0,1% периодной кислотой при температуре 4 ° С, что улучшает связывание ионов серебра и в результате окрашивания.

Сначала белки денатурируют в геле фиксирующим раствором 10% уксусной кислоты и 30% этанола и осаждают, в то же время экстрагируют детергент (в основном SDS ). Таким образом, диффузия белков значительно снижается. После многократного промывания водой гель инкубируют в растворе нитрата серебра . Ионы серебра связываются с отрицательно заряженными боковыми цепями белков. Затем лишние ионы серебра смываются водой. На заключительном этапе проявления ионы серебра восстанавливаются до элементарного серебра добавлением щелочного формальдегида . Это окрашивает участки, где присутствуют белки, от коричневого до черного.

Интенсивность окрашивания зависит от первичной структуры белка. Кроме того, на серебряное пятно влияет чистота используемых сосудов и чистота реагентов . Обычными артефактами в гелях, окрашенных серебром, являются полосы кератина в диапазоне от 54 до 57 кДа и от 65 до 68 кДа в качестве загрязнения образца до электрофореза.

Метенамин серебряные пятна

Есть несколько пятен серебра, содержащих метенамин , в том числе:

Галерея

использованная литература

внешние ссылки

  • MedEd at Loyola Histo / практический / пятна / hp2-55.html
  • [1] Hempelmann E. SDS-Protein PAGE и определение белков с помощью окрашивания серебром и иммуноблоттинга белков Plasmodium falciparum. in: Moll K, Ljungström J, Perlmann H, Scherf A, Wahlgren M (eds) Methods in Malaria Research, 5th edition, 2008, 263-266.