Метод Гольджи - Golgi's method
Метод Гольджи является окрашиванием серебра метода , который используется для визуализации нервной ткани при световой микроскопии. Метод был открыт Камилло Гольджи , итальянским врачом и ученым , который опубликовал первое изображение, сделанное с помощью этой техники в 1873 году. Первоначально он был назван Гольджи черной реакцией ( la reazione nera ), но стал более известен как пятно Гольджи. или позже, метод Гольджи.
Окрашивание по Гольджи было использовано испанским нейроанатомом Сантьяго Рамоном-и-Кахалем (1852–1934), чтобы открыть ряд новых фактов об организации нервной системы, которые вдохновили рождение нейронной доктрины . В конечном итоге Рамон-и-Кахаль усовершенствовал технику, применив метод, который он назвал «двойной пропиткой». Техника окрашивания Рамона-и-Кахала, которая используется до сих пор, называется «Пятно Кахала».
Механизм
Клетки нервной ткани плотно упакованы, и если все клетки окрашены, можно получить мало информации об их структурах и взаимосвязях. Более того, тонкие нитевидные отростки нервных клеток, включая аксон и дендриты нейронов, слишком тонкие и прозрачные, чтобы их можно было увидеть с помощью обычных методов окрашивания. Метод Гольджи окрашивает ограниченное количество клеток случайным образом полностью. Механизм, с помощью которого это происходит, по большей части неизвестен. Дендриты, как и сома клеток, четко окрашены в коричневый и черный цвета, и их можно проследить по всей длине, что позволило нейроанатомам отслеживать связи между нейронами и делать видимыми сложную сетевую структуру многих частей головного и спинного мозга. .
Окрашивание по Гольджи достигается пропиткой нервной ткани, фиксированной альдегидом, бихроматом калия и нитратом серебра . Клетки , таким образом , окрашенные заполнены микрокристаллизациями из хромата серебра .
Техника
Согласно SynapseWeb, это рецепт техники окрашивания Гольджи:
- Погрузите блок (приблизительно 10x5 мм) фиксированной формальдегидом (или перфузированной параформальдегидом - глутаральдегидом ) ткани мозга в 2% водный раствор дихромата калия на 2 дня.
- Вскоре просушите блок фильтровальной бумагой .
- Погрузите блок в 2% водный раствор нитрата серебра еще на 2 дня.
- Отрезать секции прибл. Толщина 20–100 мкм .
- Быстро обезвоживайте в этаноле , очистите и установите (например, в Depex или Enthalan).
С тех пор этот метод был усовершенствован для замены осадка серебра на золото путем погружения образца в хлорид золота, затем в щавелевую кислоту с последующим удалением серебра тиосульфатом натрия . Это сохраняет большую степень тонкой структуры с ультраструктурными деталями, отмеченными мелкими частицами золота.
Цитата
Рамон-и-Кахаль сказал о методе Гольджи:
- Я выразил удивление, которое испытал, увидев собственными глазами чудесные разоблачающие силы реакции хром-серебро и отсутствие какого-либо ажиотажа в научном мире, вызванного ее открытием.
- Recuerdos de mi vida, Vol. 2, Historia de mi labour científica . Мадрид: Моя, 1917, стр. 76.
Рекомендации
внешние ссылки
- Микрофотография клетки коры, окрашенной методом Гольджи . Галерея изображений IHC.
- Пропитки Гольджи . Изображения мозга мух.
- Визуализация дендритных шипов методом Гольджи . SynapseWeb. Включает покадровое исследование пропитки Гольджи.
- Берреби, Альберт: Клеточная биология нейронов: структура и методы исследования . (в PDF)
- Изображения окрашенных срезов мозга, которые включают «нейроны, окрашенные по Гольджи» в проекте BrainMaps