Бычий сывороточный альбумин - Bovine serum albumin
альбумин | |||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|
Идентификаторы | |||||||
Организм | |||||||
Символ | ALB | ||||||
Entrez | 280717 | ||||||
HomoloGene | 105925 | ||||||
RefSeq (мРНК) | NM_180992 | ||||||
RefSeq (Prot) | NP_851335 | ||||||
UniProt | P02769 | ||||||
Прочие данные | |||||||
Хромосома | 6: 91.54 - 91.57 Мб | ||||||
|
Бычий сывороточный альбумин ( BSA или «фракция V» ) представляет собой белок сывороточного альбумина, полученный от коров. Он часто используется в качестве стандарта концентрации белка в лабораторных экспериментах.
Прозвище «Фракция V» относится к альбумину, являющемуся пятой фракцией оригинальной методологии очистки Эдвина Кона, в которой использовались различные характеристики растворимости белков плазмы . Манипулируя концентрацией растворителя, pH, уровнями солей и температурой , Кон смог извлечь последовательные «фракции» плазмы крови . Этот процесс был сначала коммерциализирован с человеческим альбумином для медицинского использования, а затем адаптирован для производства BSA.
Характеристики
Полноразмерный белок-предшественник БСА имеет длину 607 аминокислот (АК). N-терминал 18-остаток сигнальный пептид отрезается от белка - предшественника при секреции, следовательно , исходный продукт белок содержит 589 аминокислотных остатков. Еще шесть аминокислот расщепляются с образованием зрелого белка BSA, который содержит 583 аминокислоты.
Пептид | Должность | Длина (AA) | МВт Да |
---|---|---|---|
Предшественник полной длины | 1 - 607 | 607 | 69 324 |
Сигнальный пептид | 1–18 | 18 | 2,107 |
Пропептид | 19–24 | 6 | 478 |
Зрелый белок | 25 - 607 | 583 | 66 463 |
Физические свойства BSA:
- Количество аминокислотных остатков: 583
- Молекулярный вес: 66 463 Да (= 66,5 кДа)
- изоэлектрическая точка в воде при 25 ° C: 4,7
- Коэффициент экстинкции 43,824 M -1 см -1 на 279 нм.
- Размеры: 140 × 40 × 40 Å (вытянутый эллипсоид, где a = b <c)
- pH 1% раствора: 5,2-7
- Оптическое вращение: [α] 259 : -61 °; [α] 264 : -63 °
- Радиус Стокса (r s ): 3,48 нм
- Константа седиментации, S 20, W × 10 13 : 4,5 (мономер), 6,7 (димер)
- Константа диффузии, D 20, W × 10-7 см 2 / с: 5,9
- Частичный удельный объем, В 20 : 0,733
- Характеристическая вязкость, η: 0,0413
- Коэффициент трения, f / f0: 1,30
- Приращение показателя преломления (578 нм) × 10-3 : 1,90
- Оптическое поглощение, A 279 нм 1 г / л : 0,667
- ε 280 = 43,824 мМ -1 см -1
- Среднее вращение остатка, [м '] 233 : 8443
- Средняя эллиптичность остатка: 21,1 [θ] 209 нм ; 20,1 [θ] 222 нм
- Расчетная a-спираль,%: 54
- Расчетная b-форма,%: 18
Приложения
BSA имеет множество биохимических применений, включая ELISA (иммуноферментный анализ), иммуноблоттинг и иммуногистохимию . Поскольку БСА представляет собой небольшой, стабильный, умеренно нереактивный белок, его часто используют в качестве блокатора в иммуногистохимии. Во время иммуногистохимии, которая представляет собой процесс, который использует антитела для идентификации антигенов в клетках, срезы тканей часто инкубируют с блокаторами BSA для связывания неспецифических участков связывания. Это связывание BSA с неспецифическими сайтами связывания увеличивает вероятность того, что антитела будут связываться только с интересующими антигенами. Блокатор БСА улучшает чувствительность за счет уменьшения фонового шума, так как участки покрыты умеренно нереактивным белком. Во время этого процесса минимизация неспецифического связывания антител важна для получения наивысшего отношения сигнал / шум. BSA также используется в качестве питательного вещества в культуре клеток и микробов. При рестрикционном переваривании BSA используется для стабилизации некоторых ферментов во время переваривания ДНК и для предотвращения адгезии фермента к реакционным пробиркам, наконечникам пипеток и другим сосудам. Этот белок не влияет на другие ферменты, которым он не нужен для стабилизации. BSA также обычно используется для определения количества других белков путем сравнения неизвестного количества белка с известным количеством BSA (см. Анализ белка Брэдфорда ). БСА используется из-за его способности усиливать сигнал в анализах, его отсутствия эффекта во многих биохимических реакциях и его низкой стоимости, поскольку его можно легко очистить из бычьей крови, побочного продукта животноводства. Еще одно применение BSA заключается в том, что его можно использовать для временного выделения веществ, которые блокируют активность необходимого фермента, тем самым препятствуя полимеразной цепной реакции (ПЦР). BSA широко используется в качестве шаблона для синтеза наноструктур.
БСА также является основным компонентом фетальной бычьей сыворотки , обычной среды для культивирования клеток.
Смотрите также
Рекомендации
дальнейшее чтение
- Хираяма К., Акаси С., Фуруя М., Фукухара К. (декабрь 1990 г.). «Быстрое подтверждение и пересмотр первичной структуры бычьего сывороточного альбумина с помощью ESIMS и Frit-FAB LC / MS». Сообщения о биохимических и биофизических исследованиях . 173 (2): 639–46. DOI : 10.1016 / S0006-291X (05) 80083-X . PMID 2260975 .
- Чжан М., Десаи Т., Феррари М. (май 1998 г.). «Белки и клетки на кремниевых поверхностях, иммобилизованных ПЭГ» (PDF) . Биоматериалы . 19 (10): 953–60. DOI : 10.1016 / S0142-9612 (98) 00026-X . PMID 9690837 .
- Мудрый С.А., Уоттерс Р.Л. (30.06.2010). «Альбумин бычьей сыворотки (7% раствор)» (pdf) . Сертификат анализа . Национальный институт стандартов и технологий США . Проверено 22 декабря 2011 .
Внешние ссылки
- Сыворотка + альбумин + бычий продукт по медицинским предметным рубрикам Национальной медицинской библиотеки США (MeSH)