Радиоиммуноанализ - Radioimmunoassay

Радиоиммуноанализ
MeSH D011863

Радиоиммуноанализ ( РИА ) является иммуноанализом , что использование радиоактивно молекул в пласте ступенчатого из иммунных комплексов . RIA - это очень чувствительный метод анализа in vitro, используемый для измерения концентраций веществ, обычно измеряющий концентрации антигенов (например, уровни гормонов в крови ) с помощью антител .

Хотя метод RIA чрезвычайно чувствителен и чрезвычайно специфичен и требует специального оборудования, он остается одним из наименее дорогих методов для выполнения таких измерений. Это требует особых мер предосторожности и лицензирования, так как используются радиоактивные вещества.

Напротив, иммунорадиометрический анализ (IRMA) - это иммуноанализ, в котором используются молекулы , меченные радиоактивной меткой, но немедленным, а не поэтапным способом.

Тест радиоаллергосорбентный (РАСТ) является примером радиоиммуноанализа. Он используется для выявления причинного аллергена для аллергии .

Метод

Как правило, для проведения радиоиммуноанализа известное количество антигена делается радиоактивным , часто путем мечения его гамма-радиоактивными изотопами йода , такими как 125-I , присоединенными к тирозину . Этот радиоактивно меченый антиген затем смешивается с известным количеством антитела к этому антигену, и в результате оба специфически связываются друг с другом. Затем добавляется образец сыворотки от пациента, содержащий неизвестное количество того же антигена. Это заставляет немеченый (или «холодный») антиген из сыворотки конкурировать с радиоактивно меченным антигеном («горячий») за сайты связывания антитела. По мере увеличения концентрации «холодного» антигена большее количество его связывается с антителом, вытесняя вариант с радиоактивной меткой и уменьшая отношение связанного с антителом радиоактивно меченного антигена к свободному радиоактивно меченному антигену. Затем связанные антигены отделяются, и радиоактивность свободного (несвязанного) антигена, остающегося в супернатанте , измеряется с помощью гамма-счетчика .

Этот метод может быть использован для любой биологической молекулы в принципе и не ограничен сывороточными антигенами, а также не требуется использовать косвенный метод измерения свободного антигена вместо прямого измерения захваченного антигена. Например, если нежелательно или невозможно нанести радиоактивную метку на интересующий антиген или целевую молекулу, можно провести RIA, если доступны два разных антитела, распознающих цель, и цель достаточно велика (например, белок), чтобы представлять несколько эпитопы к антителам. Одно антитело будет помечено радиоактивной меткой, как указано выше, в то время как другое останется немодифицированным. RIA начнется с того, что «холодному» немеченому антителу позволят взаимодействовать и связываться с молекулой-мишенью в растворе. Предпочтительно это немеченое антитело иммобилизовано каким-либо образом, например, связано с бусинкой агарозы , нанесено на поверхность и т. Д. Затем «горячему» радиоактивно меченному антителу дают возможность взаимодействовать с первым комплексом антитело-мишень. После интенсивной промывки измеряется прямое количество связанных радиоактивных антител и количественно определяется количество целевой молекулы, сравнивая его с эталонным количеством, анализируемым в то же время. Этот метод в принципе аналогичен методу нерадиоактивного сэндвич- ELISA .

История

Этот метод был разработан Соломоном Берсоном и Розалин Сассман Ялоу в Госпитале для ветеранов в Бронксе , Нью-Йорк. Это революционное открытие принесло д-ру Ялоу Нобелевскую премию по медицине в 1977 году, став второй женщиной, когда-либо получившей ее. В своей приветственной речи доктор Ялоу сказала: «Мир не может позволить себе потерю талантов половины своего населения, если мы хотим решить многие проблемы, которые нас преследуют». Ялоу разделила Нобелевскую премию с Роджером Гийемином и Эндрю Шалли, которые получили эту премию на основе своих исследований «производства пептидных гормонов в мозге».

использованная литература

шаги в методике радиоиммуноанализа

внешние ссылки