Пятно кинён - Kinyoun stain

Метод Kinyoun или окрашивание Kinyoun (холодный метод), разработанный Джозефом Дж. Киньюном , представляет собой процедуру, используемую для окрашивания кислотоустойчивых видов бактерий родов Mycobacterium и Nocardia и апикомплексного рода Cryptosporidium . Это разновидность метода, разработанного Робертом Кохом в 1882 году. У некоторых видов бактерий в клеточных стенках есть восковой липид, называемый миколовой кислотой, который позволяет им окрашивать кислотостойкость лучше, чем краситель по Граму. Уникальная способность микобактерий противостоять обесцвечиванию под действием кислоты и спирта, поэтому их называют кислотоустойчивыми. Он включает нанесение основного красителя ( основной фуксин ), обесцвечивающего средства (кислотно-спиртовой) и контрастного красителя ( метиленовый синий ). В отличие от красителя Циля – Нильсена (окраска ZN), метод окрашивания Киньюна не требует нагревания. В красителе Циля-Нильсена тепло действует как физическая протрава, а фенол (карбол карбол фушина) действует как химическая протрава. Поскольку окрашивание по Киньюну является холодным методом (без применения тепла), концентрация используемого карбол фушина увеличивается.

Резюме кислотоустойчивого окрашивания (пятно Киньюна)
Применение Реагент Цвет ячейки
Кислотный быстро Безкислотный быстрый
Первичный краситель Карбол фуксин красный красный
Обесцвечивающее средство Кислый спирт красный Бесцветный
Счетчик пятен Метиленовый синий красный Синий

Процедура окрашивания

Окраска киньюна на организме Mycobacterium smegmatis

Сделайте кислотостойкое пятно

Материалы

  • Слайд с мазком организма
  • Карбол Фуксин
  • Кислота-Спирт
  • Метиленовый синий
  • библейская бумага
  • Микроскоп

инструкции

  1. Сделайте мазок на предметном стекле с организмами
    • Очистить слайд, восковую этикетку, размазать организм, высушить на воздухе в течение 10 минут, закрепить нагреванием
  2. Окуните слайд в Carbol Fuchsin на 20 минут.
  3. Полоскание слайда
  4. Окуните предметное стекло в кислотно-спиртовой раствор на 3-5 секунд.
  5. Полоскание слайда
  6. Окуните предметное стекло в метиленовый синий на 30 секунд.
  7. Полоскание слайда
  8. Промокните предметное стекло сухой бумагой для выпечки.
  9. Наблюдайте под микроскопом.

Модификация

Метод Киньюна можно модифицировать как средство, устойчивое к слабым кислотам, при котором вместо соляной кислоты используется 5% -ная серная кислота. Слабокислотная стойкая окраска в дополнение к окрашиванию микобактерий будет окрашивать организмы, которые не могут поддерживать карбол-фуксин после обесцвечивания с помощью HCl.

Смотрите также

использованная литература